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分享PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)基本要求

發(fā)表時間： 2020-07-10

 PCR實驗指的是基因擴增實驗，其特點是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法，PCR實驗室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域，例如：乙型肝炎，禽疫病、艾滋病檢測，癌基因的檢測和診斷，個體識別，DNA指紋，親子鑒定及法醫(yī)物證等等。湖南實驗室建設(shè)就PCR實驗室設(shè)計和建設(shè)要求逐一給大家解釋：

分享PCR實驗室設(shè)計及建設(shè)基本要求
 
一、PCR實驗室布局
 
1、PCR實驗室原則上分為：①試劑準備區(qū)；②樣品制備區(qū)；③擴增區(qū)；④擴增產(chǎn)物分析區(qū)，共四個單獨的工作區(qū)域。并設(shè)有專用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。
 
2、不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密連接，需安裝物品傳遞窗。
 
① 試劑準備區(qū)和樣品制備區(qū)為擴增前區(qū)；
 
② 擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)為為擴增后區(qū)，即從：試劑準備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴增室——產(chǎn)物分析室，不得逆向流動。
 
3、實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，不得逆向流動。
 
4、各工作區(qū)的頂部應(yīng)該安裝紫外燈，紫外燈波長一般為254mm,配置要求為每20㎡一支40W的紫外燈。
 
二、實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備
 
1、試劑準備區(qū)：
 
① 主要進行試劑的制備，分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)域。
 
② 試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。
 
③ 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，天平，離心機，加樣器，振蕩器等。
 
④ 本區(qū)對氣流壓力的控制，并沒有嚴格的要求，一般為+10Pa。
 
2、樣品制備區(qū)：
 
① 主要進行樣品的保存，核酸提取，貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。
 
② 本區(qū)主要設(shè)備有冰箱，生物安全柜，離心機，加樣器，振蕩器等。
 
③ 本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染，壓力一般設(shè)計為+10Pa。
 
3、擴增區(qū)：
 
① 主要進行DNA擴增項目。
 
② 已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
 
③ 本區(qū)主要設(shè)備有：冰箱，加樣器，離心機，擴增儀等。
 
④ 本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶從本區(qū)漏出，壓力一般設(shè)計為-25Pa。
 
4、 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：
 
① 主要進行擴增產(chǎn)物的測定。
 
② 本區(qū)主要設(shè)備有加樣器，洗板機、酶標(biāo)儀和水浴箱等。
 
③ 本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域，壓力一般設(shè)計為-25Pa。
 
三、PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制
 
① 各區(qū)域之間應(yīng)具備單間的實驗工藝流、氣流、物流與人流，形成單向流程的保護屏障。避免實驗室之間的相互干擾，也防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。
 
② PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴格控制送風(fēng)、排風(fēng)的比例，以保證整個實驗區(qū)的壓力要求。
 
四、PCR實驗室裝飾
 
① 實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固，氣密性好;
 
② 所有陰陽角宜采用圓弧過度;
 
③ 墻體內(nèi)壁光潔，不積塵、易清洗、易消毒、耐腐蝕;
 
④ 地面使用環(huán)氧樹脂自流坪或PVC卷材，材料應(yīng)滿足光潔、耐腐蝕、無縫隙、無滲漏的基本要求。
 
五、PCR實驗室注意事項
 
1、區(qū)域大小設(shè)置：樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應(yīng)大一些。而試劑準備區(qū)，擴增區(qū)，擴增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對小一些。
 
2、應(yīng)急裝置配備：試劑準備區(qū)，樣品制備區(qū)應(yīng)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。
 
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